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原代乳腺上皮细胞条件重编程作育基说明书02.14-02.pdf
大。2023-02-17 13:34:42https://v4.cecdn.yun300.cn/100001_2104305288%2F%E5%8E%9F%E4%BB%A3%E4%B9%B3%E8%85%BA%E4%B8%8A%E7%9A%AE%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%9D%A1%E4%BB%B6%E9%87%8D%E7%BC%96%E7%A8%8B%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA%E8%AF%B4%E6%98%8E%E4%B9%A602.14-02.pdf下载
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使用说明
产品说明
原代乳腺上皮细胞条件重编程作育基是一种为增进乳腺原代上皮细胞体外生长而设计的完全作育基。它是一种无菌的液体混淆系统，含有目的细胞生长所必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物以及生长因子等。该作育基产品是基于碳酸氢盐的缓冲系统，在5% CO2/95%空气的作育箱中平衡时，pH值约为7.4。该作育基的配方，可以提供一个合适的营养情形，选择性地增进体外人乳腺原代上皮细胞的生长，实现体外作育周期短、本钱可控、操作便捷的目的。
使用说明
4℃避光生涯1个月内有用。
1. 乳腺原代上皮细胞的作育
人乳腺组织经消化酶消化后，经100微米筛网过滤后计数，接种在合适的作育器皿中，加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞，原代细胞首次接种后2-3 天勿动（利于细胞贴壁），作育历程中若作育基颜色变黄但细胞未长满时可换半液，镜下视察细胞未长满但NIH-3T3细胞已缺乏时，适量增补γ射线辐照后的NIH-3T3细胞（一样平常补加初始数目的一半）。
2. 乳腺原代上皮细胞的传代
镜下视察细胞形成克隆，且汇合度达80~90%时即可传代。作育箱中取出细胞，弃旧作育液，0.05%胰酶洗涤30秒后吸尽，再加入适量TrypLE™ Express酶(Gibco#12605010)，37℃孵育，10-20 min后拿出轻拍作育瓶/板侧面，显微镜下视察细胞消化情形；待消化至细胞变圆并最先脱落时用含10%胎牛血清的DMEM作育基终止消化，并将细胞转移至离心管中，300g，5 min离心；弃上清，以1-2 mL本细胞作育基产品重悬细胞，活细胞计数，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于作育瓶/板。之后，加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞，在作育板/孔中补加乳腺原代上皮细胞作育基至所需体积，轻轻摇晃混匀，外貌消毒后置作育箱，37 ℃ 、5 % CO2条件作育。其他办法同上。
要害词:
原代乳腺癌条件重编程作育基
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